首页‘菲云娱乐平台维普资讯 福建热作科技 1994年第 19卷第 1期 FujianTroPscicncc 7 37c 7／盔线莲组织培养与人工栽植研究· 2 ，／ ，／ II．芽的快速繁殖 黄德贵 陈振东 — — — — 一 — — — 一 (福建省热带作物科学研究所，漳州363001) 摘要 盒线莲是一种名贵珍稀中药材．本研究表明，用金线莲节段为培植体，经培养能大量快速 繁殖这种嵩危药用檀物的种苗．节段的腋芽分化过程中，有腋 (侧)芽萌生和原球茎增殖两途径． 固体培养基培养一个节．经 3个月僵I芽再生。其最高的繁殖倍率平均可达 5．1倍．不屙的金线莲品种 繁殖速率不同， 广西、福建盒线莲增殖速率为高．固体和藏体浅层培养的教果相同．使用MS基奉 培养基对芽繁殖倍率比I／2MS、碱置MS培养基提高了23．3、51．5％．激素BA对芽的增殖有极显著 的促进作用．添加BASppm、NAA05戚0．3ppm的激素浓度组台为茸增殖诱导最佳配方． 关键词———一；———一；堡————一 ，(／工L^彳，匕L一。。 ，，f，u roxburghii(Wal1．)lind1．)的组织培养苗为试 一 、 前 言 验 材料 ． 金线莲有药用植物之王之称，是一种名贵 (二)试验方法 珍稀的中药材．金线莲为野生植物，由于民间 本试验于 1992-1993年重复进行 培养 药用的采集，生态资源的破坏．野生资源枯 条件 同研究 I ． 竭．1990年被福建省列为濒危药用植物以保 试验一：芽增殖形态观察．将无菌株切成 护．为满足人 民药用的需求，近年来陆续有人 一 个节之茎段作培植体．接种后进行芽分化和 探索人工繁殖．据报道，金线莲种子育苗 自然 生长状况的观察．最长观察时间达 8个月． 发芽率不到千分之一．分根法或直接扦插方式 试验二：不同品种金线莲增殖培养 比较． 繁殖．则需时甚长且繁殖倍率不高．致使金线 用产于台湾、福建、广西的3个品种．建立无 莲药用生产受到韫大限射．为了解决金线莲的 菌株．选取生长健壮，高度一致的植株。切取 种苗繁殖问题，我们在组织培养时对其芽的快 植株中部含一个节，长约 1．5厘米的茎段作培 速繁殖进行了深入系统的研究，本文是这部分 植体．培养基为 l／2MS (大量元素减半．其 研究的结果 ． 他成分不变．下同)基本培养基，添加不同浓 度 BA和 NAA．蔗糖 3％，固体培养 ．BA 二、材料和方法 浓度设 l、2、3、4、5ppm (单位下同)五个 (一)试验材料 水平 ．NAA浓度设 0．3、0．5二个水平 ，组合 以台湾金线莲 (Anoectochilusl面rl~osanu$ 10个配方 ．每个品种每配方各接种茎段 l8 Hayata)及福建、广西金线莲 (Anoectochilus 个。培养 106天进行调查． ·本矸究为福建省科委 八五’科技敢美冀助基金埂 目的一部份 王传辐 林玉英 吴惶琦 同志参栅韩眦 验 特此致谢． 维普资讯 福建热作科技 1994年第 l9卷第 1期 FujianTroP8ciei1cc 试 验三：两种培养方式试验 ．培养基为 根，从而形成小植株 ．观察发现培养 80—90 1／2MS+BA4+NAA0．5，PH5．8．固体培养 天，侧芽分生组织的增殖，一般只出现主芽和 一 为琼脂 0．8％：液体浅层培养为培养基中先放 、 二级侧芽或苗．培养 150天以上，主芽、 少量脱脂棉，上加一层小滤纸。滤纸上保持浅 侧芽较高，叶片较多、大，只有少数出现三级 层液体．以台湾金线莲为供试，选取健壮植 侧芽或苗．这种腋芽萌生的增殖形成了主轴分 株，切取 中部的茎，以节切段成 2厘米左右的 枝型的芽苗．如培养时间长或多代继代繁殖， 茎段，每处理接 12个节 ，重复三 次。培养 或激素高等原因，芽或苗因节间短，多数形成 100天调查每节分化总芽数．苗高、发根数、 似丛生芽丛或丛生苗。原球茎方式：有少数叶 每节分化之鲜重． 腋芽，在腋芽原基分化后先出现芽状的原球 试验四：三种基本培养基成分效用 比较． 体，但髓后的不断增殖即形成许多原球茎状的 设MS、1／2 S、减量MS (MS所有化合物 球体，经培养继而可分化发育成苗，这种方式 用量减半)三种．舔加 BA4、NAA0．5，蔗糖 发生的芽一般较多，但细小。 3％。接种供试、每处理接种数及重复、调查 (二)三种不同来源的金线莲芽增殖能力 项 目等 同试验三 。 的差异 试验五：添加不同激素、有机物及水质试 桂、闽、台三个金线莲品种，经培养芽的 验。基本培养基为 1／2MS。设掭加不同种类 增殖系数是不同的 (见表 1)．从表 1数据看 的激素、有机物、糖类、水等，并以不掭加生 出，广西、福建金线莲品种芽 的增殖数为多， 长激素的培养基作为对照 (见表 4)，供试、 而台湾金线莲增殖数较少．芽增殖率前两品种 每处理接种数等同试验三， 分别 比台湾金线％。但增 试验六 ：固体 1／2MS培养基添加 BA与 殖鲜重，台湾金线莲 比广西、福建金线莲分别 活性炭不同浓度 的培养效果。每处理接种 16 增 加 了 3．8、 19．8％，而且 根数 也增 加 了 个茎段。其他同试验三． 230．2、486％。如表所示，台湾金线莲芽分化 试验七 ：固体 1／2MS培养基添加不同 率虽较低，但芽体粗大，根多：而广西、福建 浓度 BA 与 NAA 的配方筛选 ．BA浓度设 金线莲芽分化率较高，但芽较弱小。 3、4、5、6四个水平，NAA浓度 0．3、0．5、 (三)两种培养方式对金线个配方，其他 同试验 导效果 =： 两种不同的培养方式对培植体芽的分化与 生长的影响，结果如表 2所示．由表 2看出， 三、实验结果 液体浅层培养芽的增殖速率、苗高比固体培养 (一)培植体芽的分化与生长形态 分别高达 5．7、2．6％，而发根数．鲜重却分别 培植体经培养，观察到芽的分化有侧芽萌 减少 35、10．3％，但上述数据经统计分析均 生和原球茎发生两种方式．培养一周后，茎节 未达到显著差异，因而两种方法都是可行的． 上潜伏的叶腋芽萌动膨大，芽不断伸展，逐渐 (四)三种不同基本培养基对金线莲芽的 形成主芽．叶腋芽是单生的，极个别节上能对 分化与生长的影响 生二个腋芽．未发现茎部或切 口处长出不定 比较三种基本培养基中芽的分化与生长情 字。15天时芽最高可达 0．6cm，25天后 主芽 况，结果见表 3． 蓬部的节再生侧芽 (称一级侧芽)，45天左右 数据表 明， 以 MS培养基 诱 导效 果最 一 级侧芽节上又可发生二级钢芽．随着芽的生 佳，1／2MS为次，减量 MS效果最差。芽繁 i、出现叶片，节处可见茸毛状根毛并产生 殖倍率，MS培养最高可达 5倍，比减量 MS 维普资讯 福建热作科技 1994年第 19卷第 1期 Fujia13TroPsciencc 培养基高达 51．5％．差异显著．苗的生长高 加 NAA0．5或 IBA0．5．或 NAA 与 IBA二者 度，MS培养基生长量 比减量 Ms．1／2MS 同时使用，各处理间增殖效果均无显著差异。 培养基分别提高了 I8．0、23．7％．均呈极显著 4．蛋白胨的效应。从表4处理 I与 3比较 差异．MS培养基 的芽增殖重量达 0．9l克 ， 显示，多加蛋 白胨 300ppm对苗的高度有显著 比减量 MS培养基增重 了63．O％，差异扳显 的促进作用，但芽的增殖数、增殖重均来达显 著，比 1／2MS高达 40．1％，差异显著 。而 著差异。 根的条教．三种培养基 的影响结果差异不显 5．糖类，水质使用的比较．从表 4处理 1 著，因此，试验可 以得出．使用MS培养基 与 6的数据比较看出，应用普通砂糖、井水 比 时不宜减量． 蔗糖、蒸馏水，芽的增殖数和苗高未达显著差 (五)添加不同的激素、有机物及水质对 异．而生长鲜重则是使用砂糖和井水明显地优 培植体芽分化与生长的影响 于蔗糖和蒸馏水。这为组培中简化培养，节约 表 4是 I／2MS固体培养基添加不同激 成本提供了依据。 素，有机物与使用糖类和水质对金线莲芽发育 (六)培莽基添加不同浓度 BA与活性炭 生长的比较表，并以不添加生长之激素培养作 对芽增殖的影响 为对照 。 表 5是 1992年 6月 10日一11月 18日在 1．从表 4看 出，对照组芽的增殖数仅 有 培养室常温 2 3l℃的培养结果．从表所示， 1．86个，它与 6个处理相 比芽的增殖数都极 古有 BA5ppm之培养可诱导最多的芽，其繁 显 著 减 少 ．减 少 幅 度 在 48．9．-62．6％ 殖率可达 4．24倍。BA五个水平中，0．3％活 (1．96-2．67倍)。而且增殖鲜重也最少 ．与 3 性炭对芽体产生了数量都有抑制作用．但对芽 个处理成显著差异．虽然苗的生长高度与6个 的生长则有促进作用．对处理组合进行方差分 处理相 比有显著增高的效应 ．但苗茎细弱瘦 析和邓 氏极差测验 ．结果表 明BAS+插性炭的 高． 增殖芽数与其他处理组合的差异均达显著或极 2．添加细胞分裂索的效应，对表4处理 1 显著 (表 5)。 与处理 2的数据进行方差分析，结果表明添加 (七)培养基添加 BA与 NAA不同浓度 ZT0．I对芽增殖数、苗高、鲜重的促进作用均 对芽增殖的影响 未达显著的差异．因而添加 ZT是不必要的． 本研究比较了BA与NAA不同浓度激素 3．舔加生长索类激素的作用。从表 4处理 组合对芽增殖的影响．结果如表6。 f 1、4、5相 比看 出．在 BA4的基础上单独添 1 I 裹 1 不同金蛀莲品种节震芽的分化和生长的差异 品 种 每节分化 最高苗均值 每抹苗发根 每节增殖鲜 生长状态 总芽教 (个) “m) 均数 (条) 重均值 (g) 广西金线O 芽较细小 福建金线 芽细小 台湾金线 芽体粗壮根披多 注：表 中数据为每品种 肋十配方的平均值． 维普资讯 福建热作科技 1994年第 19卷第 1期 FujianTropscicncg 裹 2 商 培养方式 每节分化总芽数 最高苗均值 每株苗发根均数 } 每节增殖鲜重 (十) (c皿0 (条J } ( 固体培养 4．03a 3．92a 2．O6n { ’ 0．6497a 液体浅层培养 4．26a 4．02t I．34a { 0．5831t 注：同栏平均值注有相同的美文字母，表示差异禾i幻’豆‘著水平． 裹 3 不 与生长的影响 基率培养基 每节分化芽总数 最高苗均值 每株苗发根均数 每节增殖鲜重 ( (个) (c g) m) (条) MS 4．97 a JA te5 A I，82i8 A 0．9100I a A l／2MS 4．03 ablA 3．92 b B 2．06l8 ^ 0．6497lb AB 碱量MS 3．28 b lA 4．1l b B 1．科 li ^ 0．5584lb B 注：同栏平均值注有不同酌小写美文字母．表示差异逸 ％显著水平；不同的太写字母．表示差异迭』％枉显 著水平． 囊4 添加不同鞋蠢 有机蜘殛水质对盒蝗垄增基的影响 激索pgnn 龉 自糖类 芽增殖总数 最高菌均值 母 标 酉生 每节分化后鲜重 胨 水 质 根数均值 BA zT N从 IBA 3％ 个) c《 ) 妞) 口D皿 (条) 4J 5 蔗糖 燕僖承 0，ab A ，．92 B 206 0．6497lbc AB 410．10．5 蔗糖 jI{}馏水 t25ab ^ 4．11 B 18．l 5706Ibc B 4{ 0．5 3o0蔗糖 蒸馏水 ，．9lb A t54bc B 1．97 O．7II8lab AB 4f 5n5 蔗糖 jI{}僮承 t27ab A 4．i0 B 2．06 689lJab A丑 4J 5 蔗糖 jI{}馏水 3．64 b A 4．O7 B 161 0．5603lbc B 41 0．5 砂糖 井木 4．97 A t24bc B ll72 0．8586ja A I 蔗糖 蒸馏木 i．86 B 5．，1 ^ 2．47 0．4797fc B 注：同栏平均值注有不同的小写羹文字母。表示羔畀选 ％显著水平 ：不同的走写荚文字母。表示盖异达，％ 粗正著水平． · 4 · 维普资讯 福建热作科技 1994年第 i9卷第 1期 FujianTr0Pscicnce 裹 5 器加BA与活性炭不同浓度组台培养一节金线莲之增殖生长均值 处理 BA NAA 活性 每节分化总芽 最高苗均值 每株苗生根数均值 每节分化后之鲜重琏 号 ppm ppm 炭 ％ 数 (个) (cm) (条) 值 (g) l l 0．5 O 1．I9 f D 5．83 b B 2．95 ab AB O626I cd BCD 2 1 0．5 O．3 1．1】 f D 8．73 A 3．55 A 0．5945 d D 3 2 0I5 O 1．68 cf CD 5．42 bc BC 2l6 bc BCD 0．7232 bc BCD 4 2 0．5 O．3 1．23 ef D 8．53 A 3．2S AB 0．6210 cd CD 5 3 0．5 O 2．47 bcde BC 4．94 cd BC 1．27 de EF 0．7283 b BC 6 3 5 3 1．64 de／ CD 8．】5 a A 2．56 ab ABC 0．6686 bcd BCD 7 4 0．5 O 2．94 b AB 4．67 cd C 0．96 EF 0．7524 b B 8 4 0．5 O．3 2．00 cde BCD 7．84 A 11．85 cd CDE 0．7008 bc BCD 9 5 05 0 4．24 A 4．48 d C 0．58 F 1．O004 A l0 5 O5 0．3 2．85 bc B 7．89 A 1．32 de DEF D．7717 b B 注：同栏平均值注有不同的小写英文字母，表示差异达J 显著水平；不同的太写英文字母，表示差异迭』％ 板显著水平． 裹6 添加BA与NAA不同浓度组合培养一节金线莲之增殖生长均值 处理 BA NAA 每节分化的芽苗致 最高苗均值 每株苗生根数均值 薄节分化后之鲜重均值 号 ppm ppm (个) (ctit) 条) (g) 1 3 0．3 2．67 d C 3．86 A 1．30 A 0．5221 cde BCD 2 3 0．5 2．94 cd BC 3．95 A 1．35 A 0．5244 cde BCD 3 3 I 2．75 d BC 3．78 A 150 A 0．4818 de CD 4 4 0．3 2．85 cd BC 3．62 A 1．29 A 0．4718 c D 5 4 0．5 3．03 hod BC 4．00 A 1．66 A O．59l6 bcde ABCD 6 4 l 3．37 abed ABC 3．95 A 1．83 A 0．5863 bode ABCD 7 S 0．3 3．77 ab AB 3．93 A 1．37 A 0．6690 abc ABCD 8 5 0．5 4．13 A 4．13 A I．47 A 0．6809 abe ABCD 9 5 1 3．36 abed ABC 4．24 A 1．75 A 0．6419 abed ABCD 10 6 O．3 3．45 abed ABC 4．09 A I_S2 A 0． 7794 A l】 6 0．5 3．67 abc ABC 4．32 A 2．07 A 0 ． 7230 ab AB I2 6 1 3．30 bcd ABC 4．1I A 2．1】 A 0．7121 ab ABC 注：同栏平均值注有不同的小写其丈字母，表示差异选 显著水平；不同的太写英文字母，表示差异达』％ 极显著水平． · 5 · 维普资讯 福建热作科技 1994年第 l9卷第 l期 FujianTYoPscience 衷7 不同BA浓度对金线莲一节增殪舶影响 BA 每节分化的芽苗数 最高茁均值 I 每株茁生根数均值 节分化后之鲜重均伯 (Vpm) (叶) I (cm) 。 (条) l (皇) ，．77 i a l A l4．10 Iab {A I 1．53 a lA 。0．7378 r a lAB 6 ，．47 l ab I AB I4．26 l a j A I 2．00 j a lA 10664g j a I A 4 3．II lbc BC 3．85 l b l A I 1．59 l a 『A 105496 l b IBC 3 2．78 l c j C I 3．g6 I b l A - 1．38 l 8 『A l0．5086 I b 】 C 注：同拦平均值注有不同小写英文字母+表示差异i如 显著水平；不同的是写英文字母，表示差异迭，％极显著 水平 。 表 6的数据经方差分析得出，BA对每节 科植物，其原球茎的分化途径与兰科石斛兰属 金线莲产生的芽苗数、最高苗均值、鲜重均值 等植物的原球茎分化是相似的，这为金线莲植 等均有极显著 的促进作用；而 NAA、BA与 物芽发育规律提供了新资料 。 NAA 互作 的影 响没有 显 著 差 异 。另 外 ， 我们选择分布在桂、闽、台三省 (区)被 BA、NAA对生根的效应也均不显著。 认为最具疗效鹊三十 品种 以比较三者增殖情 所含有的4个不同浓度 BA对节培养的影 况。结果表明， 广西、福建金线莲二品种增 响不同 (见表 7)。芽的增殖数：BA5 6ppm 殖率为高，台湾金线莲增殖牢较低，而且看 与3ppm相 比，差异极显著；5ppm 比4ppm 到，广西、福建二品种节段培养时芽的再生有 差异极显著；5ppm与 6ppm差异不显著 苗 较多节段是以原球茎发生的方式增殖的，发生 }n生长高度：6ppm与 3、4ppm 比，差异显 的芽较多，但芽较小 随明来源不同的品种， 著。鲜重 ：6ppm 与 3 4ppm 比，差异极显 由于其 自身的生理生化状况不一，会影响分化 著；5ppm 与 4ppm 比，差异显著。因而可 结果。因而，如何通过应用细胞分裂素，蔗糖 见，本试验的 i2个配方中，以BA5+NAA0．5 堆度、光照强度等有关因子控制不同品种的分 和BAS+NAA0．3两组合的配方为住 化途径，有待进～步探讨 。 何政坤等 “认为液体震荡培养金线莲， 四、结论与讨论 对促进芽的增殖较固体培养为佳。但液体震荡 金 线 莲 为兰 科 (Orchidaceae) 金 线 受副震荡器的限制．无法大量震荡培养．且比 莲属 ( no8clochilusBlume)多年 生 草 固体培养多增加电力耗损。我们试验表明，液 本植物 ，是 中药界 之圣 品，价格商 昂。为 体浅层培养是简易、节约成本，叉效果好的金 开发金线莲药材生产 ，刘新褡等 何政 坤 线)均有组 织培 我们试 验 比较 了 MS、 l／2MS、减量 养繁殖 金 线莲 之探讨 ” ” 但各有研 Ms三种基本培养基培养效应。结果表明，在 究的侧重和局限性。为此．我们对金线莲快速 MS培养基中金线莲节段芽的增殖效果明显优 繁殖中材料、方法、技术、配方等系列问题作 于 1／2MS、减量 Ms培养基。这可能是金线 了深入系统研究，拟之使应用技术达到生产实 莲芽的分化需要较高的盐类浓度及促进物质之 日可行性 。 缘故 ， 金线莲组织培养中有关芽的再生途径，刘 本研究从培养基 中添加8A与活性炭不同 新裕 。 、何政坤 “等研究未作描述 。我们 浓度对芽增殖的影响看出，添加活性擞对芽体 过形态建成观察表 明，节段腋芽的再生过程 产生之数量有抑制作用．但对苗生长高度、生 测芽萌生和原球茎发生二途径 。金线莲为兰 根数则有促进效果。 (下转第 ，。页) 6 · 维普资讯 福建热作科技 I994年第 l9卷第 1期 FujianTrooscjence 蕉优质 丰产，必须抓好如下几个主要关键 。 学簏肥，实现优质丰产．提高经济效益。从 目 l、推广挖沟留土植蕉 前的个体分散经营体制．是难于实现叶片营养 挖沟留土植蕉是山坡蕉圉丰产栽培的关键 诊断和土壤养分分析。为此，建议统一建立专 措施之一。它既方便培土，又起蓄水和保水作 门机构，服务于农业生产。 用．可促进香蕉的生长和发育，显著提高蕉园 4、做好病虫害预测，及时全面防治 的经济效益。目前，芗城遁已推广此法植蕉数 香蕉病虫害的发生和流行 ．往往有遁域 千亩．建议有关部 门和生产单位，积极组织蕉 性，在温度和湿度较适合的情况下．病害的发 农推广此法 。 生和流行甚猛，危害极大，若不及时全面开展 2、推广套种绿肥 防治，而是局部分散进行防治，效果甚差．既 山坡地植蕉存在土壤干旱、肥力低的缺 达不到防治效果，又增加了成本。为了克服个 点，为了提高土壤保水能力，增加有机质，改 体分散经营，难于实行统一行动的局面，建议 善土壤结构，克服单施化肥的弊端，必须大力 有关部门成立预测机构．组织蕉农及时全面防 推广新蕉园套种绿肥。 治，提高防治效果。 3、提倡科学施肥，增加经济效益 5、推广果实套袋技术 目前蕉农普遍存在盲 目施肥 ，对肥料种 香蕉套袋后 ，可减少病虫危害，增加果色 类 配比和施肥时期的重要性认识不足，直接 美观，冬期套袋还可防止果实冻伤 ，增加饱满 影响香蕉的生长和产量 为此，必须提倡叶片 度，提高商品等级和价格 ，并显著提高产量， 营养诊断和土壤养分测定，根据测定结果，确 增加效益。 定施肥种类和数量．结台香蕉生长期，做到科 (上接第6页)这与刘新裕等 ” 的研究结果是 与人工栽植研究I。无菌外植体建立技术 相似的。我们试验证明，金线莲节段培养时， 和配方，福建热作科技．(3-4)’ 培养基 中尉加 BA、NAA等激素，而是 BA (2]陈裕，林坤瑞，管其宽 1990 野生花叶 对芽分化与生长有显著的促进作用。从 BA与 开唇兰、大斑叶兰资源调查研究初报 。亚 NAA不同浓度组合试验得出．以基本培养基 热带植物通讯，(2)：61-63。 附 加 BA5ppm+ NAA0 5ppm 或 (3]刘新褡，蔡新声，黄汉津等。1987。金线ppm 二个浓度组合的配方 莲大量繁殖与栽培之生育性状、种间比较 其芽的诱导效果为佳。这-A 配方经生产性反 及营养成分研 究。 中华农业研 究，36 复使用，证明都是可行 的。另外，使用普通砂 (4)：357—366。 糖和井水能替代蔗糖和蒸馏水获得 良好 的培养 (4)何政坤，张淑华．陈振荣 1987。金线莲 结果，这为金线莲简化、节约成本及工厂化生 之组织培养与驯化栽植。台湾省林业试验 产种苗提供了科学依据。 所研究报告季刊，2 (2)：83-105。 参考文献 (5]陈泽字，江秉华，陈钢。1992。金线莲快 速繁殖的研究。中草药，(2)：108。 (1)黄德贵，陈振东。1993。金线ae;

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