CYcD2基因转入丽格海棠研究星辉官方注册！[目的]改变丽格海棠的开花时间，为丽格海棠分子育种奠定基础。[方法]以丽格海棠叶片为外植体，利用液氮直接转化法将

　　pBI121一CYcD2转入根癌农杆菌EHA52中，再通过农杆菌介导法将CYcD2基因导入丽格海棠中。[结果]选择100nc／L的卡那霉素作为

　　转化外植体的起始选择压力。将经农杆菌共培养及过渡培养后的材料转入筛选培养基中，60d后获得l5个不定芽，再在生根培养基中

　　培养20d后，全部生根。PCR检测发现，l5株卡那霉素抗性植株中有6株表现出与阳性对照相同的特异性条带，剩余植株为假转化体。

　　Southern杂交分析表明6个转化植株中有5个出现了杂交信号，即为转基因植株，仅有1个为假阳性。[结论]该研究已成功地将外源基

　　棠(Begoniaxhiemalis)无菌苗数株，剪取其倒三叶，将叶片切割

　　徐 美隆( 1979 一 ) ，男，四川大竹人，硕士研究生，研究方向：花

　　片于上述菌 液 中 浸泡 5 —10 min，培 养 温度 为 24 ℃，然 后用

　　经过 Km筛选 获得 的抗 性组 培苗 叶片 为材 料提 取 丽格海 棠

　　段作为模板 ，然后 按 照从 TaKaRa 公 司 购买 的 随机引 物标 记

　　转移至 尼龙膜上 ，于 2 ×SSC 溶液 中漂洗 ，用 干净 滤纸 吸干 残

　　mg／L 的 Km筛选培养 条件下 表现 出脱分 化和 再分 化受 到不

　　同程度 的抑 制 ，其半抑 制剂量 为 25 ～50 mg／L，全 抑制 剂量为

　　1次 ) ，共获得 l5 个不 定芽 ，在 生根培 养基 中培养 20 d后 ，全

　　较大损伤 。经过过渡培养 3 d，将其转 入筛 选培养 基 MS2 中 ，

　　基上 未见 有 农杆 菌 的生 长 ，说 明农杆 菌 的生 长 已被 完 全抑

　　制。经农杆菌处理过 的叶片在 MS2 中培养 6o d(每 20 d 继代

　　的 6 株植 株表现 出与 阳性 对照 相 同的特 异性条 带 ( 图 3) ，表

　　丽格 海 棠 品种 不 同 的外 植 体 材 料 对 Km的 敏 感性 不 同。